卡通次元 丁香酒精粗索求物在39℃要求下对PANC-1细胞生物学活动的影响 Effect of Crude Extract of Clove Alcohol on the Biological Behaviour of PANC-1 Cells at 39?C
贵州中医药大学基础医学院卡通次元，贵州 贵阳
收稿日历：2023年3月17日；委用日历：2023年4月14日；发布日历：2023年4月25日
摘抄
场地：探究丁香酒精粗索求物在39℃要求下是否会影响胰腺癌细胞的增殖、移动、侵袭和凋一火。花式：1) CCK8法检测在39℃要求下丁香酒精索求物对胰腺癌细胞增殖活性的影响；2) 平板克隆形成和软琼脂克隆法检测在39℃要求下丁香酒精索求物对胰腺癌细胞孕育和增殖的影响；3) 划痕实际检测在39℃要求下丁香酒精索求物对胰腺癌细胞移动和侵袭身手的影响；4) Hoechst33258染色和流式细胞术检测在39℃要求下丁香酒精索求物对细胞形态的变嫌及凋一火的影响。按捺：CCK8按捺标明，丁香酒精粗索求物可以防止PANC-1细胞的孕育和增殖，防止作用呈浓度依赖性，聚首39℃恶果愈加显著，划痕实际实际按捺标明，丁香酒精粗索求物可以防止PANC-1细胞移动，聚首39℃恶果愈加显著，然则37℃和39℃对照莫得显著变化，显微镜下不雅察加入丁香酒精粗索求物后，PANC-1细胞出现显著的变化，从限定的菱形变成了细长广阔界感变圆形态发生了变化，Hoechst33258实际按捺线路丁香酒精粗索求物可以引起PANC-1细胞的细胞核出现亮蓝色、凋一火小体和核谮媚等满足，流式细胞术也考证了丁香酒精粗索求物可以引导PANC-1细胞的凋一火39℃要求下凋一火细胞数增多。论断：丁香酒精粗索求物可以防止细胞孕育增殖，防止细胞的移动侵袭并引导细胞的凋一火，并聚首39℃恶果愈加显著，从而从不同的机制来泄露抗肿瘤作用。
环节词
丁香酒精粗索求物，胰腺癌，增殖，移动，凋一火
Effect of Crude Extract of Clove Alcohol on the Biological Behaviour of PANC-1 Cells at 39˚C
食品加工在线Zhenwei Qin， Dezhong Liao*
School of Basic Medicine， Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang Guizhou
Received: Mar. 17th， 2023; accepted: Apr. 14th， 2023; published: Apr. 25th， 2023
ABSTRACT
Objective: To explore whether the crude extract of clove alcohol at 39˚C affects the proliferation， migration， invasion and apoptosis of pancreatic cancer cells. Methods: 1) CCK8 assay to detect the effect of crude extract of clove alcohol on the proliferation activity of pancreatic cancer cells at 39˚C; 2) plate clone formation and soft agar cloning assay to detect the effect of crude extract of clove alcohol on the growth and proliferation of pancreatic cancer cells at 39˚C; 3) scratch assay and Transwell assay to detect the effect of crude extract of clove alcohol on pancreatic cancer cells at 39˚C; 4) Hoechst 33258 staining and flow cytometry to detect the effect of clove alcohol extract on cell morphological changes and apoptosis at 39˚C. Results: The results of CCK8 showed that the crude extract of clove alcohol could inhibit the growth and proliferation of PANC-1 cells， and the inhibitory effect was concentration-dependent， and the effect was more obvious in combination with 39˚C. The results of the scratch test showed that the crude extract of clove alcohol could inhibit the migration of PANC-1 cells， and the effect was more obvious in combination with 39°C， but there was no significant change between 37˚C and 39˚C control. The results of Hoechst33258 experiment showed that the crude extract of clove alcohol could cause the nucleus of PANC-1 cells to appear bright blue， apoptotic vesicles and nuclear fragmentation. The flow cytometry also verified that the crude extract of clove alcohol could induce apoptosis in PANC-1 cells with an increase in the number of apoptotic cells at 39˚C. Conclusion: The crude extract of clove alcohol can inhibit cell growth and proliferation， inhibit cell migration and invasion and induce apoptosis， and the effect is more obvious in combination with 39˚C， thus exerting anti-tumor effects from different mechanisms.
Keywords:Clove Alcohol Crude Extract， Pancreatic Cancer， Proliferation， Migration， Apoptosis
Copyright © 2023 by author(s) and Hans Publishers Inc.
This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0).
1. 序论
胰腺癌是一种致命的疾病，是具有侵袭性和致命性的恶性肿瘤之一 [1] ，在以前的几十年中，胰腺癌在公共东谈主类健康中形成了广大的包袱，2020年公共新会诊胰腺癌患者揣度为49万东谈主，胰腺癌在统共恶性肿瘤中排行第12位 [2] 。在好意思国，胰腺癌是统共癌症中的第四大物化原因 [3] ，瞻望到2030年将成为第二大物化原因 [4] ，总发病率瞻望到2040年将增多约30% [5] 。因此当前确当务之急是寻找一个新的绿色治疗战略来擢升胰腺癌会诊和治疗。丁香桃娘科植物干燥的花蕾，一种具有温里药性的中草药，在中国使用仍是有着悠久的历史，具有温中降逆，散寒止痛，温肾助阳的功效，可治疗脾胃虚寒，呃逆吐泻，知友冷痛，肾虚阳痿等症 [6] 。商量发现丁香索求物具有防止癌细胞增殖的作用，况且具有明确抗肿瘤恶果 [7] 。热疗是一种历史悠久的绿色安全无反作用的治疗肿瘤的花式，在1866年德国的Busch使用丹毒导致骨赘瘤病东谈主发烧的花式，收效养息了患者 [8] ，在之后的一百年间，医师和学者们一直试图使用这种花式使患者发烧来治疗癌症。课题组前期商量标明，39℃高温培养可以防止癌细胞的孕育和增殖 [9] ，本商量探索不同浓度的丁香酒精粗索求物对胰腺癌细胞的增殖移动和凋一火的影响，并聚首39℃要求是否会增强其影响的恶果。
2. 材料
2.1. 实际细胞
东谈主胰腺癌细胞PANC-1购于好意思国ATCC。
2.2. 药品与试剂耗材卡通次元
丁香的干燥花蕾(购买自贵州中医药大学第二附庸病院，货号191113)杜氏校正伊戈尔培养基DMEM (好意思国Gibco股份有限公司，货号8122687)胎牛血清(中科迈晨北京科技有限公司，货号) CCK-8试剂盒Transwell小室Matrigel基质胶结晶紫粉末(北京索莱宝科技有限公司) Hoechst33258 (北京索莱宝科技有限公司)，凋一火试剂盒(BD公司)。
2.3. 主要仪器
CO2恒温恒湿培养箱(好意思国Thermo Fisher)超净职责台(苏州净化)流式细胞仪BD FACSVE PCR扩增仪(BD Medical Technology公司)多功能酶标仪(北京百乐科技有限公司) −20℃雪柜(海尔集团) −80℃雪柜(海尔集团)。
3. 实际花式
3.1. 细胞培养
东谈主胰腺癌细胞系PANC-1孕育在含有10% FBS胎牛血清和1%双抗的高糖DMEM培养液，并在二氧化碳浓度为5%的37℃和39℃的两套水套式培养箱中孕育。为了确保温度准确，在培养箱中摈弃温度计技能检测，显微镜不雅察细胞情景，待其孕育至70%~80%密度，可进行后续实际，因细胞长满会影响后续实际按捺。
3.2. 丁香酒精索求物的制备
干燥的丁香花蕾购买自贵州中医药大学第二附庸病院，为了制备酒精索求物，用精确电子天平称取干燥的丁香花蕾按照1 g加入5 ml的95%酒精比例配制，在室温下索求两周，然后将酒精回荡到新的15 ml离心管中，并将视其为100%的索求物。避光保存在−20℃雪柜，以备后续实际使用。
3.3. CCK8实际检测细胞的增殖活性
额外显微镜不雅察PANC-1细胞孕育至70%~80%密度时，用含有5% FBS培养基进行细胞重悬，进行细胞计数，培养基进行稀释调整细胞密度为2 × 103接种于96孔板中，过夜贴壁后，加入不同浓度的丁香酒精粗索求物，放入37℃和39℃培养箱链接培养72 h后，加入配好的CCK8溶液，每孔100 μl孵育2 h使用酶标仪测定各个孔细胞在450 nm吸光度的OD值，算计细胞的增殖活性。
3.4. 平板克隆实际检测细胞的克隆身手
不雅察PANC-1细胞长至70%~80%摆布，凭据实际所需细胞数算计，将细胞以1 × 103每孔进行训诲，克隆实际所用培养基均为含5